體外培養(yǎng)時(shí)，一定的濃度范圍條件下，葡萄糖主要經(jīng)糖酵解循環(huán)轉(zhuǎn)化成乳酸來為細(xì)胞提供能量。（氨基酸）氨基酸在細(xì)胞內(nèi)的重要生理作用主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：①是蛋白質(zhì)的基本組成單位，用于合成蛋白質(zhì)和多肽；②可用于合成某些具有重要生理作用的含氮化合物，如核酸、尼克酰胺等；③某些氨基酸還具有獨(dú)特的生理作用，如甘氨酸參與生物轉(zhuǎn)化作用，丙氨酸和谷氨酰胺參與細(xì)胞內(nèi)氨的運(yùn)輸?shù)龋虎芸赊D(zhuǎn)變成糖類和脂肪，參與氧化供能。細(xì)胞所能利用的氨基酸是L型同分異構(gòu)體，D型氨基酸不能被利用。不同的細(xì)胞對(duì)氨基酸的需求各異，但有些必需氨基酸是細(xì)胞不能自身合成的，必須依靠外源的細(xì)胞培養(yǎng)液提供。其余非必需氨基酸，細(xì)胞可以自己合成，或通過轉(zhuǎn)氨作用由其他物質(zhì)轉(zhuǎn)化而來，但是在細(xì)胞培養(yǎng)基中添加適當(dāng)濃度的非必需氨基酸可以減輕細(xì)胞在合成方面的負(fù)擔(dān)，提高谷氨酰胺及其它必需氨基酸的利用率。絕大部分細(xì)胞對(duì)谷氨酰胺有較高的要求，可能因其不僅是細(xì)胞的主要氮源，且可作為細(xì)胞生長的能源物質(zhì)和嘌呤、嘧啶核苷酸的前體，另外還可直接作為細(xì)胞增殖和產(chǎn)物合成中的蛋白質(zhì)和多肽的組成成分。在缺少谷氨酰胺時(shí)，細(xì)胞會(huì)生長不良，甚至死亡。由于谷氨酰胺具有多種生理作用。無酚紅培養(yǎng)基確保了細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。湖北基礎(chǔ)培養(yǎng)基牌子

    1/2cs生長培養(yǎng)基的培養(yǎng)結(jié)果為：馬鈴薯莖端在1/2cs生長培養(yǎng)基上的存活率為100％，培養(yǎng)16d的幼苗，表現(xiàn)為植株健壯、平均莖高、平均莖中粗為，葉色濃綠，根系發(fā)達(dá)、平均根數(shù)為8個(gè)。如圖4所示。對(duì)比培養(yǎng)例4：將1/2cs基本培養(yǎng)基替換為1/2ms基本培養(yǎng)基，其余完全同培養(yǎng)實(shí)例4，1/2ms基本培養(yǎng)基的成分及用量如表1所示。1/2ms生長培養(yǎng)基的培養(yǎng)結(jié)果為：馬鈴薯莖端在1/2ms生長培養(yǎng)基上的存活率為100％，培養(yǎng)16d的幼苗，表現(xiàn)為植株健壯、平均莖高、平均莖中粗為，葉色濃綠，根系發(fā)達(dá)、平均根數(shù)為6個(gè)。如圖4所示。培養(yǎng)實(shí)例4和對(duì)比培養(yǎng)例4的培養(yǎng)結(jié)果比較：馬鈴薯莖端在1/2cs生長培養(yǎng)基和1/2ms生長培養(yǎng)基上的存活率均為100％；在相同條件下培養(yǎng)16d時(shí)，與1/2ms生長培養(yǎng)基相比，1/2cs生長培養(yǎng)基中的幼苗長勢更佳，其莖高、莖中粗、根的數(shù)量均優(yōu)于1/2ms生長培養(yǎng)基。如圖4所示。培養(yǎng)實(shí)例5：哥倫比亞型擬南芥葉片及根愈傷**誘導(dǎo)(1)擬南芥葉片愈傷**誘導(dǎo)培養(yǎng)基：cs基本培養(yǎng)基+，用超純水溶解，。cs基本培養(yǎng)基的成分及用量如表1所示。(2)擬南芥根愈傷**誘導(dǎo)培養(yǎng)基：cs基本培養(yǎng)基+2,，用超純水溶解，。cs基本培養(yǎng)基的成分及用量如表1所示。。湖北基礎(chǔ)培養(yǎng)基牌子減血清培養(yǎng)基提高了細(xì)胞培養(yǎng)的重復(fù)性和可靠性。

    mgso4·7h2o20-200mg/l，2-羥基乙胺10-50mg/l，cecl31-20mg/l，mnso4·h2o1-10mg/l，feso4·7h2o1-10mg/l，vb15-50mg/l，生物素1-10μg/l；將各原料攪拌均勻后，調(diào)節(jié)ph為6-7，121℃**，自然冷卻，制得發(fā)酵培養(yǎng)基a。更推薦地，所述發(fā)酵培養(yǎng)基a的制備方法為：取各原料：葡萄糖80g/l，酵母浸膏20g/l，k2hpo42g/l，mgso4·7h2o50mg/l，2-羥基乙胺40mg/l，cecl310mg/l，mnso4·h2o3mg/l，feso4·7h2o3mg/l，vb110mg/l，生物素7μg/l；將各原料攪拌均勻后，調(diào)節(jié)ph為，121℃**15min，自然冷卻，制得發(fā)酵培養(yǎng)基a。推薦地，所述發(fā)酵培養(yǎng)基b的制備方法為：取各原料：琥珀酸1-10g/l，尿素1-5g/l，殼聚糖20-100mg/l；將各原料攪拌均勻后，調(diào)節(jié)ph，**，制得發(fā)酵培養(yǎng)基b；更推薦地，所述發(fā)酵培養(yǎng)基b的制備方法為：取各原料：琥珀酸5g/l，尿素2g/l，殼聚糖80mg/l；將各原料攪拌均勻后，調(diào)節(jié)ph為，121℃**15min，自然冷卻，制得發(fā)酵培養(yǎng)基b。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明取得的有益效果主要包括但是并不限于以下幾個(gè)方面：本發(fā)明發(fā)酵培養(yǎng)基采用兩部分組成，發(fā)酵培養(yǎng)基a側(cè)重于菌株增殖的提升，發(fā)酵培養(yǎng)基b側(cè)重于谷氨酸的合成和分泌；前期細(xì)胞增殖時(shí)。

    1)、初代培養(yǎng)：繡球外植體，將葉片剪去，自來水沖洗干凈。在超凈工作臺(tái)上把已經(jīng)沖洗干凈的外植體浸入75％酒精中消毒30s，用無菌水沖洗3～4次。使用白貓漂白水和無菌水按1：4的體積比配制消毒液，將外植體放入消毒液浸泡40min，其中白貓漂白水為上海白貓(集團(tuán))有限公司生產(chǎn)的“白貓”牌家用漂白水。消毒完成，將外植體接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，建立無菌再生系統(tǒng)，誘導(dǎo)培養(yǎng)環(huán)境為光照強(qiáng)度1500lx條件下，溫度25℃，光照時(shí)間16h；黑暗條件下，溫度23℃，光照時(shí)間8h，培養(yǎng)6～8周。其中誘導(dǎo)培養(yǎng)基為ms+～～，誘導(dǎo)培養(yǎng)基的ph值為。(2)、繼代培養(yǎng)：以建立的無菌再生系統(tǒng)為對(duì)象，將無菌外植體轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基，其中增殖培養(yǎng)基為ms+～～，培養(yǎng)環(huán)境為光照強(qiáng)度1500lx條件下，溫度25℃，光照時(shí)間16h；黑暗條件下，溫度23℃，光照時(shí)間8h，培養(yǎng)8～12周。每隔8～12周轉(zhuǎn)接入新的增殖培養(yǎng)基，增殖培養(yǎng)基的ph值為。(3)、生根培養(yǎng)：經(jīng)過繼代培養(yǎng)的繡球組培苗，取2～3cm的頂芽，放入生根培養(yǎng)基，其中生根培養(yǎng)基為1/2ms+～～，生根培養(yǎng)基的ph值為。誘導(dǎo)培養(yǎng)環(huán)境為光照強(qiáng)度1500lx條件下，溫度25℃，光照時(shí)間16h；黑暗條件下，溫度23℃，光照時(shí)間8h，培養(yǎng)8～12周。。DMEM培養(yǎng)基提供了細(xì)胞生長所需的基本營養(yǎng)成分。

    3)擬南芥葉片愈傷**的誘導(dǎo)方法：用手術(shù)剪刀剪開長勢良好的無菌葉片，用鑷子將其取出擺放在步驟(1)的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，使傷口接觸培養(yǎng)基；于溫度23-25℃、濕度50-70％、光照強(qiáng)度1500-2500lux、光照和黑暗交替(光照時(shí)間16h、黑暗時(shí)間8h)條件下培養(yǎng)。(4)擬南芥根愈傷**的誘導(dǎo)方法：用鑷子取出無菌苗的根，用手術(shù)剪刀剪開后平鋪于步驟(2)的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，培養(yǎng)條件同步驟(3)。(5)cs誘導(dǎo)培養(yǎng)基的誘導(dǎo)結(jié)果為：擬南芥葉片愈傷**誘導(dǎo)時(shí)，培養(yǎng)6-8d在切口處出現(xiàn)顆粒狀愈傷**，培養(yǎng)24-26d獲得嫩綠色致密的團(tuán)塊狀愈傷**，顆粒狀愈傷**誘導(dǎo)率及愈傷**總誘導(dǎo)率均為100％；擬南芥根愈傷**誘導(dǎo)時(shí)，培養(yǎng)5-7d在切口處開始出現(xiàn)少量顆粒狀愈傷**，培養(yǎng)20-22d獲得較大體積的淡黃色松脆型愈傷**，且在愈傷**周圍觀察到大量致密分布的白毛，顆粒狀愈傷**誘導(dǎo)率及愈傷**總誘導(dǎo)率均為100％。如圖5所示。對(duì)比培養(yǎng)例5：將cs基本培養(yǎng)基替換為ms基本培養(yǎng)基，其余完全同培養(yǎng)實(shí)例5，ms基本培養(yǎng)基的成分及用量如表1所示。ms誘導(dǎo)培養(yǎng)基的誘導(dǎo)結(jié)果為：擬南芥葉片愈傷**誘導(dǎo)時(shí)，培養(yǎng)7-10d在切口處出現(xiàn)顆粒狀愈傷**，培養(yǎng)24-26d獲得嫩綠色致密的團(tuán)塊狀愈傷**，顆粒狀愈傷**誘導(dǎo)率及愈傷**總誘導(dǎo)率均為100％。MEM培養(yǎng)基在細(xì)胞生物學(xué)研究中廣泛應(yīng)用。湖北基礎(chǔ)培養(yǎng)基牌子

RPMI1640培養(yǎng)基提高了細(xì)胞的存活率和生長速率。湖北基礎(chǔ)培養(yǎng)基牌子

    此法由巴斯德創(chuàng)立，用于酒類消毒而得名。目前用于牛乳消毒。方法有兩種：一種為℃加熱15秒，另一種為63-66℃加熱30分鐘。大多采用**種方法。(2)煮沸法。在1個(gè)大氣壓下，水煮沸后溫度達(dá)100℃，煮沸5分鐘后可殺死一般**繁殖體。如于水中加入2%碳酸鈉，可將其沸點(diǎn)提高至105℃，既可促進(jìn)芽胞的殺滅，又可防止金屬器皿生銹。(3)流通蒸氣消毒法。又稱常壓蒸氣消毒法，常用附諾(Amold)流通蒸氣**器，利用1個(gè)大氣壓下100℃水蒸氣進(jìn)行消毒，10-30分鐘后**繁殖體被殺死，但對(duì)芽孢作用不大。(4)間歇**法（fractionalsterilization）。采用間歇方式達(dá)到**目的。將**物品置于阿諾流通蒸氣**器內(nèi)，100℃加熱15-30分鐘，每日1次，連續(xù)3次。每次**后取出物品置37℃孵育箱過夜，致殘存的芽胞發(fā)育成繁殖體，次日再通過流通蒸氣**器加熱而被殺滅。如此反復(fù)，既可殺滅芽胞，又可使不耐高溫的物質(zhì)免受影響。若某些物質(zhì)不耐100攝氏度，則可將溫度下降至75-80℃，每次加熱時(shí)間延長到30-60分鐘，常用血清凝固器對(duì)呂氏血清培養(yǎng)基和L-J培養(yǎng)基的**屬此方法。(5)高壓蒸氣火菌法。利用密閉的耐高壓蒸氣**器(autoclave)，在蒸氣不外溢的條件下，使鍋內(nèi)壓力增高，隨之蒸氣溫度也增高。通常在℃。湖北基礎(chǔ)培養(yǎng)基牌子