轉(zhuǎn)錄組測(cè)序結(jié)果及TCGA數(shù)據(jù)庫分析）圖5RNA-Seq和m6A-seq聯(lián)合鑒定SOCS2是介導(dǎo)的m6A修飾的下游靶基因PLoSOne2015,在許多不同種類的RNA中，都已觀察到N6-腺苷(m6A)的甲基化，但其在microRNAs中還沒有被研究。研究者在FTO1C1,FTO2D4和FTO3C3細(xì)胞系中，通過敲除m6A甲基轉(zhuǎn)移酶FTO篩選到表達(dá)差異的microRNA,說明miRNA受m6A甲基化的調(diào)控。進(jìn)一步通過MeRIP-Seq發(fā)現(xiàn)相當(dāng)一部分的microRNA具有m6A修飾。通過motif分析，他們發(fā)現(xiàn)了區(qū)分甲基化和非甲基化microRNA的一致序列。該文章所述的表觀遺傳修飾在基因表達(dá)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控的復(fù)雜性上增加了一個(gè)新的層次。圖FTO敲除對(duì)甲基化的miRNAs的穩(wěn)定狀態(tài)的影響。參考文獻(xiàn)Y,DominissiniD,RechaviG,HeC:Geneexpressionregulationmediatedthroughreversiblem(6)(5):(1):(12):(6):(1):(1):(uridine)(41):(6)(7540):(1):(7481):(4):(6)A-LAIC-seqrevealsthecensusandcomplexityofthem(6)(8):UTRm(6)(4):(7544):(6)(6):(5):(7667):(2):"">pan>xiainducesthebreastcancerstemcellphenotypebyHIF-dependentandALKBH5-mediatedm(6)(14):"">pan>(40):(6)(3):(1):(1):(4):(11):。維持細(xì)胞內(nèi)外環(huán)境的穩(wěn)定。細(xì)胞質(zhì)是細(xì)胞內(nèi)的液體，其中包含了各種細(xì)胞器和細(xì)胞骨架等結(jié)構(gòu)。上海模式科研技術(shù)服務(wù)培養(yǎng)

在人類疾病研究中數(shù)據(jù)表明，常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型按產(chǎn)生原因分為以下5類：自發(fā)性動(dòng)物模型、誘發(fā)型動(dòng)物模型、遺傳工程動(dòng)物模型、生物醫(yī)學(xué)動(dòng)物模型和陰性動(dòng)物模型。下面上海研錄帶大家一起看看吧：1、自發(fā)性動(dòng)物模型：是指動(dòng)物未經(jīng)任何有意識(shí)的人工處理，在自然條件下或基因突變條件下所產(chǎn)生的疾病模型。主要包括突變型的遺傳病模型和近郊系的疾病模型。2、誘發(fā)型動(dòng)物模型：亦稱實(shí)驗(yàn)性動(dòng)物模型。是使用物理、化學(xué)或生物致病因素誘導(dǎo)動(dòng)物產(chǎn)生某些類似人類疾病表現(xiàn)而制備的動(dòng)物模型。此模型具有制備方法簡(jiǎn)單，實(shí)驗(yàn)條件容易控制，重復(fù)性好等特點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于藥物篩選、毒理、傳染病、病理機(jī)制的研究。3、遺傳工程動(dòng)物模型：是利用遺傳工程技術(shù)對(duì)動(dòng)物基因組進(jìn)行修飾，用于研究基因功能或疾病機(jī)制的動(dòng)物模型。也稱基因修飾動(dòng)物模型，是指利用胚胎工程和基因工程等生物技術(shù)有目的的干預(yù)動(dòng)物的遺傳組成，導(dǎo)致動(dòng)物出現(xiàn)新的性狀，并使其能夠有效地遺傳下去，形成新的可供生命科學(xué)研究的和其他目的所用的動(dòng)物模型。4、生物醫(yī)學(xué)動(dòng)物模型：也是指利用健康生物的特定生物學(xué)特征，研究人類疾病相似表現(xiàn)得模型。這類動(dòng)物模型與人類疾病存在一定的差異，研究者應(yīng)加以比較，從中獲得有關(guān)材料。上海兔科研技術(shù)服務(wù)購買由于大部分研究使用到的是人類來源的細(xì)胞，種植到免疫正常的動(dòng)物體內(nèi)會(huì)發(fā)生免疫排斥反應(yīng)。

RNA各種可逆的化學(xué)修飾被認(rèn)為是一種新的表觀遺傳調(diào)控方式。m6A是真核生物mRNA常見的化學(xué)修飾，在調(diào)控mRNA穩(wěn)定性，剪切和翻譯方面具有重要的作用。作者使用轉(zhuǎn)錄組測(cè)序發(fā)現(xiàn)了METTL3（甲基轉(zhuǎn)移酶3），一種主要的RNAN6-腺苷-甲基轉(zhuǎn)移酶，在人肝細(xì)胞（HCC）和多種實(shí)體中高表達(dá)。在臨床上，METTL3的過度表達(dá)與肝細(xì)胞患者不良預(yù)有關(guān)。體外實(shí)驗(yàn)證明敲除METTL3會(huì)抑制HCC細(xì)胞增殖，遷移及克隆形成。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證明敲除METTL3會(huì)明顯抑制HCC體內(nèi)成瘤和肺轉(zhuǎn)移。另外，使用CRISPR/dCas9-VP64系統(tǒng)，內(nèi)源性高表達(dá)METTL3會(huì)促進(jìn)HCC細(xì)胞在體外和體內(nèi)生長(zhǎng)。通過轉(zhuǎn)錄組測(cè)序、m6A-Seq、MeRIP-PCR，作者確定了SOCS2（細(xì)胞因子信號(hào)2的抑制因子）作為METTL3介導(dǎo)的m6A修飾的下游靶基因。敲除METTL3表達(dá)會(huì)消除SOCS2mRNAm6A修飾并增強(qiáng)SOCS2mRNA表達(dá)。m6A介導(dǎo)的SOCS2mRNA降解是依賴于m6A“讀取器”蛋白YTHDF2?？傊琈ETTL3在HCC大部分高表達(dá)中,并通過m6A-YTHDF2依賴機(jī)制抑制SOCS2表達(dá)從而促進(jìn)HCC進(jìn)展。因此，作者發(fā)現(xiàn)了在肝發(fā)生過程中表觀遺傳改變的一種新機(jī)制。圖4RNA甲基化轉(zhuǎn)移酶METLLT3在肝組織中高表達(dá)。

保存于嚴(yán)密緊塞或加蓋的容器里，同時(shí)在容器外上標(biāo)簽，并隨同材料在溶液中投入相應(yīng)的標(biāo)簽，以免相互混淆。標(biāo)簽上注明固定液、材料來源、日期等。標(biāo)簽上的文字，應(yīng)用黑色鉛筆或繪圖黑墨水書寫。3.脫水注意事項(xiàng)（1）脫水原理：乙醇與石蠟不相溶，而二甲苯既能溶于乙醇又能溶于石蠟。當(dāng)組織中全部被二甲苯占有時(shí)，光線可以透過，組織呈現(xiàn)出不同程度的透明狀態(tài)。（2）脫水必須在有蓋的玻璃品中進(jìn)行，防止吸收空氣中的水分。（3）在更換高一級(jí)的脫水劑時(shí)，不要移動(dòng)材料以免損壞，可用吸管吸出器皿中的脫水劑，再用吸水吸盡器皿內(nèi)剩余液，然后于皿中加入高一級(jí)脫水劑。（4）在低濃度酒精中，每級(jí)停留不宜太長(zhǎng)，否則易使組織變軟，助長(zhǎng)材料的解體。（5）在高濃度或純酒精中，每級(jí)停留的時(shí)間也不宜太長(zhǎng)，否則會(huì)使組織變脆，影響切片。（6）如需過夜，應(yīng)停留在70%酒精中。（7）脫水必須徹底，否則不易透明，甚至使透明劑內(nèi)出現(xiàn)白色混濁現(xiàn)象。4.透明注意事項(xiàng)（1）使用透明劑時(shí)，要隨時(shí)蓋緊蓋子，以免空氣中的水分進(jìn)入。（2）更換每級(jí)透明劑，動(dòng)作要迅速，一方面為了不使材料塊干涸，另一方面能避免吸收濕氣。（3）在透明過程中，如果材料周圍出現(xiàn)白色霧狀，說明材料中的水未被脫凈。通過不同分組之間的細(xì)胞對(duì)于劃痕區(qū)修復(fù)能力的不同，可以判斷各組細(xì)胞的遷移與修復(fù)能力的差別。

用伊紅乙醇液對(duì)比染色1~3min。（4）將切片放入95%乙醇中洗去多余的紅色，然后放入無水乙醇中3~5min，吸干后將切片放入二甲苯Ⅰ、Ⅱ中各3~5min。3、觀察在鏡下可見卵巢呈扁橢圓形，表面為單層扁平上皮細(xì)胞或單層立方上皮，卵巢實(shí)質(zhì)分為皮質(zhì)和髓質(zhì)?？梢娚掀?，原始卵泡和生長(zhǎng)卵泡。卵巢組織中各發(fā)育階段卵泡及卵巢基質(zhì)的形態(tài)結(jié)構(gòu)清晰可見,細(xì)胞核呈藍(lán)紫色,細(xì)胞質(zhì)及間質(zhì)成分呈淺紅色,卵泡中卵母細(xì)胞、卵泡細(xì)胞、透明帶均清晰可見。注意事項(xiàng)1.取材注意事項(xiàng)（1）取材動(dòng)作要迅速，不宜作太久的拖延以免組織細(xì)胞的成分、結(jié)構(gòu)等發(fā)生變化。（2）切片材料應(yīng)根據(jù)需要觀察的部位進(jìn)行選擇，盡可能不要損傷所需要的部分。（3）切取的組織塊不宜太大，以利于固定劑穿透，通常以5mmx5mmx2mm或10mmx10mmx2mm為宜。2.固定注意事項(xiàng)（1）一般固定液，都以新配為好，配好后應(yīng)貯存在陰涼處，不宜放在日光下，以免引起化學(xué)變化，失去固定作用。（2）有些混合固定液的成份之間會(huì)發(fā)生氧化還原作用，一定要在使用前才混合，如果混合太早，固定時(shí)就沒有作用了。（3）固定材料時(shí)，固定液必須充足，一般為材料塊的20~30倍，有些水分多的材料，中間應(yīng)更換1~2次新液。（4）材料固定完畢后。細(xì)胞培養(yǎng)板的選購要注意哪些?上海模式科研技術(shù)服務(wù)培養(yǎng)

動(dòng)物疾病模型是一種用于研究人類疾病的重要工具。上海模式科研技術(shù)服務(wù)培養(yǎng)

建議按照2×106每孔的數(shù)量將293T細(xì)胞均勻鋪入。(2)第二天：在24小時(shí)之內(nèi)，觀察293T細(xì)胞的匯合度在90%~95%之間時(shí)，向其中加入DNA-脂質(zhì)體復(fù)合體，DNA-脂質(zhì)體復(fù)合體制備方法如下：a)輕輕混勻LipoMax，根據(jù)說明書加入相應(yīng)量于500?lOpti-MEM無血清培養(yǎng)基中，混合均勻并置于室溫5分鐘。b)在500?lOpti-MEM無血清培養(yǎng)基中稀釋DNA，總質(zhì)量為15?g按照載體質(zhì)粒:psPAX2:=4:3:1的比例加入DNA。c)將稀釋后的LipoMax和稀釋后的DNA輕輕混勻，常溫靜置20分鐘，形成DNA-LipoMax復(fù)合體。(3)將DNA-LipoMax復(fù)合體輕柔地滴加至細(xì)胞培養(yǎng)皿中，輕輕搖晃培養(yǎng)皿混勻，放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。(4)病毒收集濃縮病毒：加入DNA-LipoMax復(fù)合體48小時(shí)后，收集病毒上清，同時(shí)加入10ml預(yù)溫的293T培養(yǎng)基到細(xì)胞培養(yǎng)皿中。將收集到的病毒上清存在4℃冰箱中;收集72小時(shí)病毒上清，與48小時(shí)病毒上清混在一起。將離心機(jī)溫度降溫到4℃，600g，離心5分鐘，去除其中的細(xì)胞碎片，上清液經(jīng)?m濾頭過濾，加入病毒濃縮液，配制濃縮病毒液。將濃縮后的病毒放于4℃冰箱搖床上，旋轉(zhuǎn)過夜。第二天，4度離心機(jī)，3000~4000g離心15分鐘。棄掉上清液，加入1Xpbs或培養(yǎng)基重懸。上海模式科研技術(shù)服務(wù)培養(yǎng)