轉(zhuǎn)錄組和m6A分析顯示精子發(fā)生相關(guān)基因的表達(dá)和選擇性剪接發(fā)生了改變[19]。YTHDC2可促進(jìn)靶基因的翻譯效率，并降低其mRNA的豐度，在精子發(fā)生過(guò)程中起關(guān)鍵作用。當(dāng)減數(shù)**開(kāi)始時(shí)YTHDC2表達(dá)上調(diào)，YTHDC2敲除小鼠的生殖細(xì)胞沒(méi)有經(jīng)過(guò)偶線期的發(fā)育導(dǎo)致小鼠不育[20]。在DNA損傷反應(yīng)中，METTL3可促進(jìn)DNA聚合酶κ（Polκ）與核酸剪切修復(fù)途徑快速定位到UV引起的DNA損傷位點(diǎn)，當(dāng)缺失METTL3時(shí)，細(xì)胞無(wú)法迅速修復(fù)UV照射引起的突變，并且對(duì)UV照射更加敏感[25]。在淋巴細(xì)胞性小鼠過(guò)繼轉(zhuǎn)移模型中，Mettl3缺陷通過(guò)影響mRNAm6A修飾，降低SOCS家族mRNA衰減，增加mRNA和蛋白表達(dá)水平，從而抑制IL-7介導(dǎo)的STAT5活性和T細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)態(tài)增殖和分化，進(jìn)而抑制腸炎的發(fā)生[21]。在肝中，METTL14通過(guò)調(diào)控pri-miRNA的m6A修飾，影響MiR-126的生成加工，從而抑制肝的轉(zhuǎn)移[22]。在乳腺細(xì)胞中，低氧刺激能促進(jìn)依賴低氧誘導(dǎo)因子HIF的ALKBH5的表達(dá)，而ALKBH5過(guò)表達(dá)降低了NANOGmRNA的m6A修飾，從而穩(wěn)定mRNA提高NANOG的表達(dá)水平，終增加乳腺干細(xì)胞所占的比例[23]。此外，低氧誘導(dǎo)乳腺細(xì)胞中依賴ZNF217的NANOG和KLF4的mRNAm6A甲基化抑制，且ALKBH5敲除降低免疫缺陷小鼠乳腺的肺轉(zhuǎn)移[24]。在肺中。動(dòng)物疾病模型可以分為兩種類型：自然模型和人工模型。上海動(dòng)物科研技術(shù)服務(wù)培養(yǎng)

原理HE染色主要使用蘇木精和伊紅這兩種染液，其中蘇木精堿性染液為藍(lán)色，可以將組織的酸性結(jié)構(gòu)染成藍(lán)紫色（細(xì)胞核呈現(xiàn)藍(lán)色；軟骨基質(zhì)、鈣鹽顆粒呈深藍(lán)；粘液呈灰藍(lán)）；伊紅是一種化學(xué)合成的酸性染料，在水中解離成帶負(fù)電荷的陰離子，易于蛋白質(zhì)氨基中的正電荷結(jié)合使細(xì)胞漿染色。細(xì)胞漿、肌肉、結(jié)締組織、嗜伊紅顆粒等被染成不同程度的紅色或粉紅色。材料與儀器小鼠、固定液、酒精、二甲苯、石蠟、蜂蠟蘇木精染液、伊紅酒精溶液、鹽酸酒精溶液甘油蛋白粘片劑、中性樹(shù)膠石蠟包埋機(jī)、切片機(jī)、恒溫箱、蠟杯酒精燈、解剖剪、培養(yǎng)皿、鑷子、單面刀片染色缸、蓋玻片、載玻片、玻片盤(pán)、顯微鏡溫度計(jì)、水浴鍋步驟一、制作卵巢石蠟切片1、取材小鼠腹腔注射戊巴比妥鈉（50mg/kg）進(jìn)行麻醉，頸椎脫臼法處死小鼠，取出雙側(cè)卵巢。取下所需組織，切成一小塊3~4mm厚。2、固定、洗滌、脫水（1）將切好的卵巢組織用生理鹽水洗一下，使用中性福爾馬林固定液固定30~50min。后用流水沖洗3次，每次5min。（2）卵巢組織依次經(jīng)70%、80%、90%乙醇溶液脫水，各30min。（3）再放入95%、**乙醇溶液各2次，每次20min。3、透明、透蠟（1）使用純酒精、二甲苯等量混合液處理組織15min。上海裸鼠科研技術(shù)服務(wù)技術(shù)腫瘤細(xì)胞侵襲能力檢測(cè)在學(xué)（遷移、侵襲）和免疫學(xué)（遷移、趨化）中是常規(guī)實(shí)驗(yàn)。

靜置25分鐘后把酒精倒干，用吸水紙吸出多余的酒精，然后配壓縮膠，同樣的操作，關(guān)鍵是梳子要插得快，要小心梳子下產(chǎn)生氣泡，然后靜置30分鐘。如果是當(dāng)天跑膠，我會(huì)等上層膠凝2個(gè)小時(shí)再用，但要注意防干燥縮水，可以在一個(gè)小時(shí)的時(shí)候沿著梳子上緣加點(diǎn)電泳液。所以我一般提前一晚制膠，泡于純水或者電泳液里置于4度冰箱暫存。三、蛋白電泳1、上樣前準(zhǔn)備把膠組裝到電泳芯上，注意密閉性(否則漏液)，如果內(nèi)槽漏液就不是勻強(qiáng)電場(chǎng)了，條帶可能就不是一條直線。然后內(nèi)槽倒?jié)M電泳液，拔梳子，這一步要小心，梳子要兩邊一起緩緩?fù)习纬?，然后觀察泳道內(nèi)有無(wú)脫落的膠?；蛘吣z絲，有的話用1毫升注射器吸出。然后從冰箱取出蛋白樣品，解凍。準(zhǔn)備振蕩器。2、上樣和電泳注意，上樣后蛋白會(huì)開(kāi)始慢慢在膠中彌散，所以上樣越快越好。我習(xí)慣先上蛋白Marker,再上蛋白樣品，蛋白上樣前確保樣品完全解凍和充分振蕩(推薦使用振蕩器振蕩)，吸的時(shí)候沒(méi)有拉絲即可，建議上樣分鐘把樣品從冰上取出來(lái)，不然樣品中SDS可能會(huì)結(jié)晶析出，從而影響電泳效果。上層膠80V25分鐘，下層膠120V65分鐘。四、轉(zhuǎn)膜1、轉(zhuǎn)膜前準(zhǔn)備我會(huì)在電泳結(jié)束0分鐘準(zhǔn)備，把轉(zhuǎn)膜液配好置于4度冰箱預(yù)冷，然后裁膜，準(zhǔn)備轉(zhuǎn)膜裝置。

RNA各種可逆的化學(xué)修飾被認(rèn)為是一種新的表觀遺傳調(diào)控方式。m6A是真核生物mRNA常見(jiàn)的化學(xué)修飾，在調(diào)控mRNA穩(wěn)定性，剪切和翻譯方面具有重要的作用。作者使用轉(zhuǎn)錄組測(cè)序發(fā)現(xiàn)了METTL3（甲基轉(zhuǎn)移酶3），一種主要的RNAN6-腺苷-甲基轉(zhuǎn)移酶，在人肝細(xì)胞（HCC）和多種實(shí)體中高表達(dá)。在臨床上，METTL3的過(guò)度表達(dá)與肝細(xì)胞患者不良預(yù)有關(guān)。體外實(shí)驗(yàn)證明敲除METTL3會(huì)抑制HCC細(xì)胞增殖，遷移及克隆形成。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證明敲除METTL3會(huì)明顯抑制HCC體內(nèi)成瘤和肺轉(zhuǎn)移。另外，使用CRISPR/dCas9-VP64系統(tǒng)，內(nèi)源性高表達(dá)METTL3會(huì)促進(jìn)HCC細(xì)胞在體外和體內(nèi)生長(zhǎng)。通過(guò)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序、m6A-Seq、MeRIP-PCR，作者確定了SOCS2（細(xì)胞因子信號(hào)2的抑制因子）作為METTL3介導(dǎo)的m6A修飾的下游靶基因。敲除METTL3表達(dá)會(huì)消除SOCS2mRNAm6A修飾并增強(qiáng)SOCS2mRNA表達(dá)。m6A介導(dǎo)的SOCS2mRNA降解是依賴于m6A“讀取器”蛋白YTHDF2?？傊琈ETTL3在HCC大部分高表達(dá)中,并通過(guò)m6A-YTHDF2依賴機(jī)制抑制SOCS2表達(dá)從而促進(jìn)HCC進(jìn)展。因此，作者發(fā)現(xiàn)了在肝發(fā)生過(guò)程中表觀遺傳改變的一種新機(jī)制。圖4RNA甲基化轉(zhuǎn)移酶METLLT3在肝組織中高表達(dá)。維持細(xì)胞內(nèi)外環(huán)境的穩(wěn)定。細(xì)胞質(zhì)是細(xì)胞內(nèi)的液體，其中包含了各種細(xì)胞器和細(xì)胞骨架等結(jié)構(gòu)。

注意事項(xiàng)1.病毒包裝的幾個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)主要包括：細(xì)胞因素、載體系統(tǒng)(盡量使用成熟的商業(yè)化載體系統(tǒng))、構(gòu)建重組的質(zhì)粒正確與否、質(zhì)粒抽提純化情況、包裝轉(zhuǎn)染控制(24、48小時(shí)的細(xì)胞及熒光狀態(tài)判斷)、目的基因?qū)Σ《景b影響(基因大小、序列情況、蛋白功能毒性等都會(huì)影響到是否能包裝成功)。，需要觀察包裝病毒后的48h培養(yǎng)基顏色是否橙紅。3.病毒濃縮：病毒一般在48h和72h各收一次。如果不想濃縮病毒的話，也可以直接將收集的病毒上清作為要的細(xì)胞的培養(yǎng)基，但是可能效果會(huì)不太好。并且一般收病毒時(shí)，培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)已經(jīng)損耗了很多，那樣直接培養(yǎng)細(xì)胞會(huì)損害細(xì)胞，所以建議還是進(jìn)行濃縮后再。常見(jiàn)問(wèn)題1.包裝病毒時(shí)293T細(xì)胞狀態(tài)不好，或者鋪得過(guò)密，可以選擇放棄該次實(shí)驗(yàn)。2.目的載體過(guò)大，不易。3.避免轉(zhuǎn)染過(guò)程以及后續(xù)過(guò)程出現(xiàn)的污染。生物分子學(xué)是研究生命體系中分子結(jié)構(gòu)、功能和相互作用的學(xué)科。上海組織科研技術(shù)服務(wù)分離

以客戶需求為導(dǎo)向，提供個(gè)性化的科研技術(shù)服務(wù)，助力科研項(xiàng)目的順利實(shí)施。上海動(dòng)物科研技術(shù)服務(wù)培養(yǎng)

在人類疾病研究中數(shù)據(jù)表明，常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型按產(chǎn)生原因分為以下5類：自發(fā)性動(dòng)物模型、誘發(fā)型動(dòng)物模型、遺傳工程動(dòng)物模型、生物醫(yī)學(xué)動(dòng)物模型和陰性動(dòng)物模型。下面上海研錄帶大家一起看看吧：1、自發(fā)性動(dòng)物模型：是指動(dòng)物未經(jīng)任何有意識(shí)的人工處理，在自然條件下或基因突變條件下所產(chǎn)生的疾病模型。主要包括突變型的遺傳病模型和近郊系的疾病模型。2、誘發(fā)型動(dòng)物模型：亦稱實(shí)驗(yàn)性動(dòng)物模型。是使用物理、化學(xué)或生物致病因素誘導(dǎo)動(dòng)物產(chǎn)生某些類似人類疾病表現(xiàn)而制備的動(dòng)物模型。此模型具有制備方法簡(jiǎn)單，實(shí)驗(yàn)條件容易控制，重復(fù)性好等特點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于藥物篩選、毒理、傳染病、病理機(jī)制的研究。3、遺傳工程動(dòng)物模型：是利用遺傳工程技術(shù)對(duì)動(dòng)物基因組進(jìn)行修飾，用于研究基因功能或疾病機(jī)制的動(dòng)物模型。也稱基因修飾動(dòng)物模型，是指利用胚胎工程和基因工程等生物技術(shù)有目的的干預(yù)動(dòng)物的遺傳組成，導(dǎo)致動(dòng)物出現(xiàn)新的性狀，并使其能夠有效地遺傳下去，形成新的可供生命科學(xué)研究的和其他目的所用的動(dòng)物模型。4、生物醫(yī)學(xué)動(dòng)物模型：也是指利用健康生物的特定生物學(xué)特征，研究人類疾病相似表現(xiàn)得模型。這類動(dòng)物模型與人類疾病存在一定的差異，研究者應(yīng)加以比較，從中獲得有關(guān)材料。上海動(dòng)物科研技術(shù)服務(wù)培養(yǎng)